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低溫等離子體激發過硫酸氫鉀滅活毛癬菌生物膜的實驗

  有研究采用氣壓低溫等離子體射流(APJ),以毛癬菌生物膜為模型進行了實驗室殺滅試驗,觀察了氣壓等離子體在不同條件下殺滅生物膜的成果,同時觀察了過硫酸氫鉀對低溫等離子體殺滅毛癬菌生物膜的促使作用。

  一、實驗部分:

  1、等離子體處理生物膜的實驗:

 ?、僭O定等離子體條件:設定載氣氣體流量為1L/min,先將載氣導入側邊管持續2min,以排出管內空氣。將生物膜板孔直接置于載物臺上距離射流口5mm位置。

 ?、诜纸M:將制得的生物膜分為5組,即陰性對照組;在生物膜上加過硫酸鹽300μ,不經等離子體處理;生物膜樣品直接經等離子體處理;生物膜上加300μL沒菌水經等離子體處理;生物膜上加過硫酸鹽300μL并保持3~5min經等離子體處理。

 ?、鄣入x子體處理方法:生物膜上加過硫酸鹽生物膜樣品的處理時間保持在3~5min。進行等離子體放電處理:啟動低溫等離子體射流處理5min。等離子體放電處理后,吸出加入的過硫酸氫鉀溶液/沒菌水,每個樣品均用沒菌鹽水清洗3次,分別進行作用評價。

  2、滅活作用評價方法:

 ?、倨桨迮囵B法:等離子體放電處理之后,直接將整個蓋玻片倒扣在SDA平板上于28℃培養5d,根據培養長出的平均菌落數評估等離子體對毛癬菌生物膜的殺滅率。

 ?、跓晒怙@微鏡法:將上述清洗3次的生物膜樣品加入200μ L SYTO9/P染料,以綠色熒光標記活細胞,以熒光標記死細胞。在暗室中染色30min后,使用1mL沒菌鹽水再次洗滌每個生物膜樣品3次,然后用熒光顯微鏡觀察。

  二、結果分析:

  從以上實驗得出了,過硫酸氫鉀對低溫等離子體對毛癬菌生物膜的滅活作用的影響:

  1、SDA平板培養法檢測結果

  結果表明,與未處理的生物膜樣品相比,隨著低溫等離子體射流處理時間的增加,菌落逐漸減小;有過硫酸鹽溶液存在時,菌落減少越加顯明。結果提示,過硫酸鹽對等離子體滅活毛癬菌生物膜有促使作用。等離子體放電3min滅活作用尚不顯明,等離子體放電5min,直接處理、間接處理以及加過硫酸鹽處理的3組的SDA平板上均未有菌落長出。結果提示,等離子體放電5min可整體殺滅毛癬菌生物膜。

  2、熒光顯微鏡檢測結果

  毛癬菌生物膜經SYTO9/P染色后,在熒光顯微鏡下可見其分別被染成綠色(活菌)和(死菌)。熒光顯微鏡檢測仍然表明,等離子體可殺滅毛癬菌生物膜;過硫酸氫鉀可協同氣壓低溫等離子體殺滅毛癬菌生物膜,且隨著處理程度的增加,殺滅效率進一步增加,其結果與SDA平板培養法一致。

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